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瓊脂糖凝膠電泳的原理

更新時間:2024-10-08點擊次數(shù):1638

一、瓊脂糖凝膠

瓊脂糖是一種從紅藻中提取的天然線性聚合物,其基本結(jié)構(gòu)是由D-L-半乳糖殘基通過α(1→3)β(1→4)糖苷鍵交替連接而成的長鏈。瓊脂糖在水中加熱溶解后,冷卻時能形成半固體狀的凝膠。制成的小顆粒用于凝膠過濾。適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾,若使用5%以下濃度的凝膠,也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點,有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內(nèi)沉降反應(yīng)的支持物。瓊脂糖凝膠具有多孔性,其孔徑大小與DNA分子的雙螺旋直徑相當(dāng),這使得它成為理想的分離介質(zhì)。此外,瓊脂糖凝膠具有親水性,且?guī)缀醪淮嬖趲щ娀鶊F,因此對生物大分子極少引起變性和吸附,是理想的惰性載體。

image.png

二、電泳原理:

1.電荷效應(yīng):

DNA分子在堿性條件下(pH>7)會電離,帶負電荷。當(dāng)DNA樣品置于電場中時,會受到電場力的作用,向正極方向移動。DNA分子的遷移速率與其所帶的電荷量成正比,而電荷量又與DNA片段的長度成正比。因此,在相同電場條件下,較長的DNA片段遷移速率較慢,而較短的DNA片段遷移速率較快。

2.分子篩效應(yīng):

分子篩效應(yīng)的原理基于分子篩的多孔結(jié)構(gòu)。分子篩晶體具有蜂窩狀的結(jié)構(gòu),晶體內(nèi)的晶穴和孔道相互溝通,并且孔徑大小均勻且固定(分子篩空腔直徑一般在3—15埃之間),只有那些直徑比較小的分子才能通過沸石孔道被分子篩吸附,而構(gòu)型龐大的分子由于不能進入沸石孔道,則不被分子篩吸附。這種根據(jù)分子大小和形狀的不同選擇吸附的現(xiàn)象,就是分子篩效應(yīng)。

瓊脂糖凝膠由瓊脂糖分子交聯(lián)形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),其孔徑大小與瓊脂糖濃度成反比。當(dāng)DNA分子通過凝膠時,會受到凝膠孔徑的阻礙。較小的DNA片段可以通過凝膠孔隙,而較大的DNA片段則會被阻擋,導(dǎo)致遷移速率降低。這種分子篩效應(yīng)使得瓊脂糖凝膠電泳能夠有效地分離不同大小的DNA片段。

image.png



三、瓊脂糖凝膠推薦


貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

310101-1G

CNBr活化瓊脂糖凝膠4HF

1G;5G;250G;500G

340201-5ML

乙醛活化磁性瓊脂糖凝膠4HF

5mL;50mL;1L

310201-1G

CNBr活化磁性瓊脂糖凝膠4HF

1G;10G;100G



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