要復(fù)蘇RAW264.7巨噬細(xì)胞，首先需要將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中，然后將其轉(zhuǎn)移到1 mL新鮮培養(yǎng)基的無菌管中，并ce底混合均勻。

接下來，使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液倒掉，隨后再加入1 mL培養(yǎng)基并充分重懸細(xì)胞。

將懸液加入含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中（10ml/10 cm皿），并將其放置在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)（37℃，5% CO2）。第二天檢查細(xì)胞的生長狀態(tài)和密度，以確定是否需要進(jìn)行傳代操作。通過這些步驟，可以有效地復(fù)蘇RAW264.7巨噬細(xì)胞，并為其后續(xù)培養(yǎng)提供良好的基礎(chǔ)。

RAW 264.7細(xì)胞的詳細(xì)復(fù)蘇具體步驟一

【準(zhǔn)備工作】

水浴鍋：預(yù)熱至37℃。

培養(yǎng)基：提前復(fù)溫至室溫或37℃。

離心機(jī)：設(shè)置好轉(zhuǎn)速（通常為1000 rpm）。

RAW 264.7細(xì)胞的詳細(xì)復(fù)蘇具體步驟二

【解凍細(xì)胞】

取出細(xì)胞：從液氮罐中取出凍存管，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋。

水浴解凍：將凍存管迅速浸入37℃的水浴鍋中，輕輕搖晃，直到細(xì)胞融化至米粒大小的冰塊時(shí)終止水浴，整個(gè)過程不超過2分鐘。

RAW 264.7細(xì)胞的詳細(xì)復(fù)蘇具體步驟三

【離心和重懸】

離心：將解凍后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，以1000 rpm離心3分鐘，棄去上清液。

重懸：加入預(yù)熱的培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞。

RAW 264.7細(xì)胞的詳細(xì)復(fù)蘇具體步驟四

【接種和培養(yǎng)】

接種：將重懸后的細(xì)胞懸液接種到新的培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻。

培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

觀察：復(fù)蘇24小時(shí)后，觀察細(xì)胞的貼壁情況，確保細(xì)胞健康生長。

【注意事項(xiàng)】

快速操作：整個(gè)復(fù)蘇過程應(yīng)盡可能在5-10分鐘內(nèi)完成，以確保細(xì)胞的高存活率。

防護(hù)措施：在水浴解凍時(shí)，使用一次性PE手套包住凍存管，避免直接接觸水源，防止污染。

細(xì)胞狀態(tài)：定期觀察細(xì)胞形態(tài)，確保細(xì)胞處于健康狀態(tài)。

通過以上步驟，研究人員可以有效地復(fù)蘇RAW 264.7細(xì)胞，確保其在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的良好狀態(tài)。

培養(yǎng)基：中科百抗RPMI1640，DMEM培養(yǎng)基

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