一、超濾離心管注意事項與技巧

1. MWCO選擇：選擇MWCO應為目標分子大小的 1/3 到 1/2。例如，濃縮100 kDa的蛋白，最好選擇30-50 kDa的MWCO。

2. 離心力是關鍵：嚴禁超過說明書標注的最大離心力！過高的離心力會壓縮膜結(jié)構(gòu)，導致不可逆的損壞和通量下降。

3. 避免膜干燥：在任何時候（包括預處理后等待加樣的短暫時間）都不要讓膜變干，干燥會yongjiu性損壞膜。

4. 處理復雜樣品：對于高粘度（如細胞裂解液）、高鹽或含有脂質(zhì)的樣品，容易發(fā)生膜堵塞?？赏ㄟ^預先稀釋樣品、間歇式離心（離心5分鐘，混勻再離心）或選擇低吸附材質(zhì)的膜（如PES膜比纖維素膜更耐污染）來改善。

5. 減少非特異性吸附：對于低濃度或珍貴的蛋白樣品，可用含0.1% BSA或Tween-20的緩沖液預處理膜，以封閉膜的吸附位點，預處理后需用目的緩沖液再潤洗一次。

6. 檢查膜完整性：如果懷疑膜已破損，可加入一種已知分子量的染料（如藍葡聚糖2000）離心，觀察濾液中是否有染料漏出。

二、超濾離心管常見問題解答 (FAQ)

Q1: 離心速度很慢，甚至沒有濾液產(chǎn)生？

原因：膜發(fā)生堵塞。

解決方案：對樣品進行預處理（過濾或離心）；稀釋樣品；嘗試“間歇離心"模式；檢查離心力是否設置正確。

Q2: 目標蛋白回收率低？

原因：非特異性吸附在膜或管壁上；膜被刺破；蛋白沉淀。

解決方案：使用低吸附材質(zhì)的超濾管；用BSA或Tween進行預處理；回收時充分吹打；確保操作過程中膜未被損壞；優(yōu)化緩沖條件（如添加溫和還原劑）。

Q3: 濾液中有我的目標蛋白（泄露）？

原因：選擇了MWCO過大的超濾管；膜破損。

解決方案：更換更小MWCO的超濾管；進行膜完整性測試。

Q4: 濃縮后樣品體積遠大于預期？

原因：樣品具有高粘度，膜上截留的液體無法被wanquan離心下去。

解決方案：適當延長離心時間或稍微提高離心力（在允許范圍內(nèi)）；回收時采用倒扣離心法。

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